Aislamiento de genes concretos de una genoteca

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http://hdl.handle.net/2183/29263Collections
- Traballos académicos (FCIE) [1005]
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Aislamiento de genes concretos de una genotecaAlternative Title(s)
Illamento de xenes concretos dunha xenotecaIsolation of specific genes from a genomic library
Author(s)
Directors
Freire-Picos, María ÁngelesDate
2021Center/Dept./Entity
Universidade da Coruña. Facultade de CienciasDescription
Traballo fin de grao (UDC.CIE). Bioloxía. Curso 2020/2021Abstract
[Resumen] Las librerías genómicas o genotecas contienen el genoma completo de un organismo determinado, digerido en fragmentos de distinta longitud e insertado en vectores de clonación, siendo un recurso continuo para el estudio de genes concretos. Existen distintas técnicas para aislar un gen específico a partir de una genoteca, en este trabajo se adaptó la estrategia del protocolo de mutagénesis dirigida con el objetivo de aislar un gen concreto, en este caso LAS2 de una genoteca doble híbrido de Saccharomyces cerevisiae. Para ello se obtuvo por PCR un fragmento de la región codificante del gen que fue empleado como megaprimer para aislar el clon que contiene LAS2 (SMP3). Se describen las sucesivas modificaciones para optimizar el protocolo hasta conseguir potenciales candidatos. El análisis por digestión enzimática indica que se obtuvieron al menos dos clones que contenían el gen deseado. [Resumo] As librerías xenómicas ou xenotecas conteñen o xenoma completo dun
determinado organismo, dixerido en fragmentos de distinta lonxitude e inserido en
vectores de clonación, sendo un recurso continuo para o estudo de xenes concretos.
Existen diferentes técnicas para illar un xene específico dunha xenoteca, neste
traballo adaptouse a estratexia do protocolo de mutaxénese dirixida co obxectivo de
illar un xene concreto, neste caso LAS2 (SMP3) dunha xenoteca dobre híbrido de
Saccharomyces cerevisiae. Para iso conseguiuse mediante PCR un fragmento da
rexión codificante do xene que empregouse como megaprimer para illar o clon que
contén LAS2. Descríbense sucesivas modificacións para optimizar o protocolo ata
obter posibles candidatos. A análise por dixestión enzimática indica que obtivéronse
polo menos dous clons que contiñan o xene desexado. [Abstract] Genomic libraries contain the complete genome of a particular organism, which
has been digested into fragments of different lengths and inserted into cloning
vectors, in order to be used as a continuous resource for the study of specific genes.
There are different techniques to isolate an individual gene from a genomic library, in
this work the strategy of the directed mutagenesis protocol has been adapted in
order to isolate a specific gene, in this case LAS2 from two-hybrid Saccharomyces cerevisiae
genomic library. With a view to achieving thus, a fragment of the coding
region of the gene was obtained by PCR, which had been used as a megaprimer to
isolate the clone containing LAS2 (SMP3). Successive modifications are described to
optimize the protocol until potential candidates are obtained. Analysis by enzymatic
digestion indicates that at least two clones containing the desired gene have been
obtained.
Keywords
Clonación
Genoteca
PCR
Mutagénesis
Megaprimer
Genoteca
PCR
Mutagénesis
Megaprimer
Rights
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