Sexado molecular en la corneja negra ("Corvus corone")

Abstract

[Resumen] Conocer el sexo de los individuos de una población es fundamental para distintas actividades humanas. En el caso de las aves no ratites, se han desarrollado varios protocolos basados en el gen CHD1 que se encuentra en ambos cromosomas sexuales. En este Trabajo de Fin de Grado se ha procedido al sexado de 58 individuos de Corvus corone pertenecientes a una población de la provincia de León. Cuarenta y siete de las 49 muestras problemas fueron sexadas amplificando dos intrones del gen CHD1 mediante sendas parejas de primers: P2/P8 (Griffiths et al. 1998) y 3007/3112 (Ellegren & Fridolfsson 1997). Como resultado del presente TFG se diseñó un único programa de termociclador que permite simultanear ambas reacciones de amplificación, disminuyendo así el tiempo de procesado en 2,5 horas por muestra. Con motivo de la necesidad de confirmar el sexado de dos muestras problemáticas se incorporó el protocolo de Wang et al. (2010), alternativo al de Griffiths et al. y optimizado para aves Passeriformes. El sexado molecular realizado para el presente TFG ha supuesto un coste aproximado de 8,11 € por muestra. Dicho coste se encuentra dentro del rango de precios ofertados por distintas instituciones españolas (3,9 - 15,75 €/muestra, IVA incluido).

[Abstract] Knowing the sex of the individuals of a given population is important for several human activities. A few “universal” protocols have been developed to sex non ratite birds, mainly based on the sex-linked CHD1 gene. In this project, 58 carrion crows (Corvus corone) from León (NW Spain) were sexed by applying the protocols by Griffiths et al. (1998) and Ellegren & Fridolfsson (1997), i.e. using primers pairs P2/P8 and 3007/3112 to amplify two introns. As many as 47 out of the 49 test individuals were unambiguously sexed by both methods. It was actually possible to use a single therocycler program to simultaneously amplify both fragments. This meant a reduction of 2.5 hours in processing time per sample. There were two problematic samples where additional confirmation was obtained by means of an alternative protocol to P2/P8. Primers developed by Wang et al. (2010) were optimised for Passeriformes was worked fine in carrion crows. The molecular sexing conducted for this project costed approximately 8.11 € per sample. This amount is within the range of prices offered by different Spanish companies (3.9-15.75 €/sample, VAT included).