Estudio sobre la regulación de la expresión de miR-34a por el lncRNA MALAT1 en cáncer de esófago
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http://hdl.handle.net/2183/27149Metadatos
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Estudio sobre la regulación de la expresión de miR-34a por el lncRNA MALAT1 en cáncer de esófagoTítulo(s) alternativo(s)
Estudo sobre a regulación da expresión de miR-34a polo lncRNA MALAT1 no cancro de esófagoRegulation of miR-34a expression by lncRNA MALAT1 in esophageal cance
Autor(es)
Director(es)
Cerdán, María EsperanzaData
2020Centro/Dpto/Entidade
Universidade da Coruña. Facultade de CienciasDescrición
Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Bioloxía molecular, celular e xenética. Curso 2019/2020Resumo
[Resumen]: El cáncer de esófago (EC), es una enfermedad que causa una gran cantidad de muertes en
todo el mundo. Se ha observado que, en múltiples cánceres, los RNA largos no
codificantes (lncRNAs) y los microRNAs, juegan papeles críticos en la progresión de los
tumores. No obstante, su actuación a nivel molecular no ha sido descubierta en su
totalidad. Este estudio plantea una metodología para explorar la posible función y
mecanismos asociados del lncRNA MALAT1 en el desarrollo del cáncer de esófago,
centrándose en su interacción con el microRNA miR-34a. Como objetivos, se cuantificará
en primer lugar por qPCR, la expresión de MALAT1 y miR-34a tanto en tejidos como en
líneas celulares sanas y de EC. Una vez conocida la expresión, se estudiará el papel de
MALAT1 en la progresión de EC, inhibiendo su expresión en la línea celular
correspondiente y cuantificando tanto la expresión de MALAT1 como de miR-34a
nuevamente por qPCR. Además, también se estudiará en la línea celular de EC mediante
el ensayo de la luciferasa, el efecto de dicha inhibición sobre miR-34a y los oncogenes c-
Myc y Met. Con el ensayo de la luciferasa, se estudiará también el efecto de miR-34a
sobre c-Myc y Met, así como la especificidad de la unión de MALAT1 y miR-34a, estudio
que también se reforzará con el ensayo biotin pull down. Por último, se llevará a cabo un
ensayo de inmunoprecipitación para estudiar la presencia de MALAT1 y miR-34a en el
mismo complejo RISC (Ago2). [Abstract]: Esophageal cancer (EC) is a malignancy that causes a lot of mortality worldwide. It is
observed, that both microRNAs and long non-coding RNAs (lncRNAs) have critical roles
in the progression of tumors. However, the underlying molecular mechanism has not been
fully characterized. The present study aimed to explore the function and associated
mechanisms of lncRNA metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript1
(MALAT1) in EC development by focusing on its interaction with miR-34a. The
objectives will be, in the first place, the quantification of MALAT1 and miR-34a
expression in tissues, healthy cell lines and EC. Once the expression is known, the role
of MALAT1 in the progression of EC will be studied, inhibiting its expression in the
corresponding cell line and quantifying the expression of MALAT1 and miR-34a again
by qPCR. In addition, the effect of such inhibition on miR-34a, c-Myc and Met, will also
be studied in the EC cell line through the luciferase assay. With the luciferase assay, the
effect of miR-34a on c-Myc and Met, as well as the specifity of the MALAT1 and miR-
34a junction, will also be studied. This study, will also be reinforced with the biotin pull
down experiment. Finally, an inmunoprecipitation test will be conducted to study the
presence of MALAT1 and miR-34a in the same RISC complex (Ago2). [Resumo]: O cancro de esófago (EC) é unha enfermidade que causa un gran número de mortes en
todo o mundo. En varios cancros, demostrouse que os lncRNAs e os microARN xogan
un papel crítico na progresión do tumor. Non obstante, a súa acción a nivel molecular non
se descubriu completamente. Este estudo propón unha metodoloxía para explorar o
posible papel e os mecanismos asociados do lncRNA MALAT1 no desenvolvemento do
cancro de esófago, centrándose na súa interacción co microRNA miR-34a. Como
obxectivos, a expresión de MALAT1 e miR-34a cuantificarase primeiro por qPCR tanto
nos tecidos como nas liñas celulares saudables e EC. Unha vez coñecida a expresión,
estudarase o papel de MALAT1 na progresión do EC, inhibindo a súa expresión na liña
celular correspondente e cuantificando tanto a expresión de MALAT1 como a miR-34a
de novo por qPCR. Ademais, o efecto da devandita inhibición sobre miR.34a e os
oncoxenes c-Myc e Met tamén se estudará na liña celular EC mediante o ensaio da
luciferase. Co ensaio da luciferase, tamén se estudará o efecto do miR-34a sobre c-Myc
e Met, así como a especificidade da unión de MALAT1 e miR-34a, un estudo que tamén
se reforzará co ensaio de biotin pull down. Finalmente, levarase a cabo un ensaio de
inmunoprecipitación para estudar a presenza de MALAT1 e miR-34a no mesmo
complexo RISC (Ago2).
Palabras chave
Esófago-Cáncer
ARN no codificantes
MicroARN
Marcadores tumorales
Expresión génica
Interferencia de ARN
Proteínas argonautas
Protooncogenes
Oncogenes myc
Metástasis
ARN no codificantes
MicroARN
Marcadores tumorales
Expresión génica
Interferencia de ARN
Proteínas argonautas
Protooncogenes
Oncogenes myc
Metástasis