Búsqueda de nuevos reguladores de la expresión de la E3 ubiquitina-ligasa Hakai

Abstract

[Resumen]: El cáncer engloba un conjunto de enfermedades que se originan a partir de alteraciones genéticas que dan lugar a la transformación progresiva de células normales en células cancerosas malignas. Entre ellas, los carcinomas son el tipo de cáncer más frecuente de todos. Estos afectan a las células epiteliales, que pierden sus características epiteliales y adquieren un fenotipo mesenquimal e invasivo, dando lugar a la formación de metástasis. En las primeras etapas de la metástasis tiene lugar la activación del programa de transición epitelio a mesénquima (TEM), un conjunto de procesos biológicos que conducen a la transición de células epiteliales inmóviles hacia células mesenquimales con capacidad de migración e invasión de nuevos tejidos. Durante la TEM, la E3 ubiquitina-ligasa Hakai actúa como regulador posttraduccional de la estabilidad de la E-cadherina presente en las uniones adherentes célula-célula, siendo responsable de su endocitosis y degradación vía lisosomas y promoviendo así el desensamblaje de estas uniones intercelulares y la consiguiente diseminación de las células cancerosas hacia nuevos tejidos a través del torrente circulatorio. El objetivo del presente trabajo consiste en estudiar el efecto de diferentes factores de crecimiento, como son EGF, HGF y TGFβ, sobre la activación de la TEM y determinar si dicha regulación puede ser mediada a través de la regulación posttraduccional de E-cadherina por Hakai. Para ello, se trataron dos líneas tumorales de colon, LoVo y HT29, con los tres estímulos a diferentes tiempos y se analizó el efecto de dichos factores sobre el fenotipo celular mediante microscopía de contraste de fases y sobre la expresión de los marcadores E-cadherina y Hakai, mediante western-blotting, qRTPCR e imunofluorescencia. Los resultados obtenidos indican que los factores de crecimiento EGF, HGF y TGFβ no regulan de forma clara la expresión y localización celular tanto de E-cadherina como de Hakai, en las líneas celulares LoVo y HT-29.

[Abstract]: Cancer includes a group of diseases that originate from genetic alterations that lead to the progressive transformation of normal cells into malignant cancer cells. Among them, carcinomas are the most common type of cancer. Carcinoma arise from epithelial cells, which lose their epithelial characteristics and acquire a mesenchymal and invasive phenotype, 7 leading the formation of metastasis. At the early stages of metastasis, the activation of the epithelial to mesenchymal transition (EMT) program takes place. EMT, a biological process that lead to the transition of immobile epithelial cells into mesenchymal cells with the ability to migrate and invade new tissues. During EMT, the E3 ubiquitin-ligase Hakai acts as a post-translational regulator of the stability of E-cadherin, which is present in the adherent cell-cell junctions. Hakai is responsible for E-cadherin endocytosis and degradation via lysosomes, promoting the disassembly of these intercellular junctions and the consequent dissemination of cancer cells into new tissues through the bloodstream. The aim of the present work is to study the effect of different growth factors, such as EGF, HGF and TGFβ, on the activation of EMT. It will be determined wether EMT regulation can be mediated through Hakai posttranslational regulation of E-cadherin. For this purpose, two different colon epithelial tumor lines, LoVo and HT29, were treated with the three stimuli at different times and the effect on the cellular phenotype was analyzed by phase contrast microscopy. Moreover, the expression of the E-cadherin and Hakai, were analyzed by western blotting, qRTPCR and immunofluorescence. The results obtained indicate that EGF, HGF and TGFβ growth factors do not clearly regulate the cellular expression and localization of both E-cadherin and Hakai, in LoVo and HT-29 cell lines.

[Resumo]: O cancro engloba a un conxunto de enfermidades que se orixinan a partir de alteracións xenéticas que dan lugar á transformación progresiva de células normais en células cancerosas malignas. Entre elas, os carcinomas son o tipo de cancro máis frecuente de todos. Estos afectan ás células epiteliais, que perden as súas características epiteliais e adquiren un fenotipo mesenquimal e invasivo, dando lugar á formación de metástase. Nas primeiras etapas da metástase, ten lugar a activación do programa de transición epitelio a mesénquima (TEM), un conxunto de procesos biolóxicos que conducen á transición de células epiteliais inmóviles cara células mesenquimais con capacidades de migración e invasión de novos texidos. Durante a TEM, a E3 ubiquitina-ligasa Hakai actúa como reguladora posttraduccional da estabilidade de E-cadherina presente nas unións adherentes célula-célula, sendo responsable da súa endocitose e degradación vía lisosomas e promovendo así a desensamblaxe destas 8 unións intercelulares e a conseguinte diseminación das células cancerosas cara novos texidos a través do torrente circulatorio. O obxectivo do presente traballo consiste en estudar o efecto de diferentes factores de crecemento, como son EGF, HGF e TGFβ, sobre a activación da TEM e determinar se dita regulación pode ser mediada a través da regulación posttraduccional de E-cadherina por Hakai. Para elo, tratáronse dúas líneas tumorais de cancro de colon, LoVo e HT-29, cos tres estímulos a diferentes tempos e analizouse o efecto de ditos factores sobre o fenotipo celular mediante microscopía de contraste de fases e sobre a expresión dos marcadores E-cadherina e Hakai, mediante western-blotting, RT-qPCR e inmunofluorescencia. Os resultados obtidos indican que os factores de crecemento EGF. HGF e TGFβ non regulan de forma clara a expresión e localización celular tanto de E-cadherina como de Hakai nas líneas celulares LoVo e HT-29.