Estudio de los sideróforos y de las proteinas receptoras producidas por las bacterias patógenas de peces: "Photobacterium damselae subsp.psicicida y Aeromonas salmonicida subsp.salmonicida"

Abstract

[Resumo] A continuación preséntase o resumo de cada un dos capítulos que fan parte desta tese doutoral. Capítulo I: Nesta sección descríbese a importancia da acuicultura a nivel mundial e as enfermidades causadas polas bacterias patóxenas que producen grandes perdas económicas a esta industria. Do mesmo modo, abórdase o tratamento destas enfermidades e a posibilidade de usar os mecanismos de captación de ferro para desenvolver novas vacinas e antimicrobiáns. Por último, preséntanse as estratexias para a expresión heteróloga de proteínas de membrana, a súa purificación e cristalización. Capítulo II: Realizouse a clonaxe, a expresión e purificación de FrpA, proteína receptora da piscibactina, sideróforo de Photobacterium damselae subsp. piscicida. A proteína obtida utilizouse en ensaios de vacinación lográndose protección nos peixes tratados. Ademáis, mediante cristalografía de Raios X realizouse unha aproximación á estrutura tridimensional de FrpA. Por outra parte, preparáronse intermedios avanzados que permitiron progresar na síntese total da piscibactina. Capítulo III: Estudáronse os sideróforos producidos por Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. En primeiro lugar illáronse, purificáronse e caracterizáronse as amonabactinas Amo P 693 e Amo P 750. Posteriormente, mediante espectrometría de masas, identificáronse os complexos de Fe(III) e Ga(III) das amonabactinas Amo T 732, Amo T 789, Amo P 693 e Amo P 750. Por outra parte, realizouse a clonaxe, a expresión e purificación de FstA, proteína receptora de sideróforos desta bacteria.

[Resumen] A continuación se presenta el resumen de cada uno de los capítulos que hacen parte de esta tesis doctoral. Capítulo I: En esta sección se describe la importancia de la acuicultura a nivel mundial y las enfermedades causadas por bacterias patógenas que producen grandes pérdidas económicas a esta industria. Del mismo modo, se aborda el tratamiento de estas enfermedades y la posibilidad de usar los mecanismos de captación de hierro para desarrollar nuevas vacunas y antimicrobianos. Por último se presentan las estrategias para la expresión heteróloga de proteínas de membrana, su purificación y cristalización. Capítulo II: Se realizó el clonaje, la expresión y purificación de rFrpA, proteína receptora de la piscibactina, sideróforo de Photobacterium damselae subsp. piscicida. La proteína obtenida se utilizó en ensayos de vacunación lográndose protección en los peces tratados. Además, mediante cristalografía de rayos X se realizó una aproximación a la estructura tridimensional de rFrpA. Por otra parte, se prepararon intermedios avanzados que permitieron progresar en la síntesis total de la piscibactina. Capítulo III: Se estudiaron los sideróforos producidos por Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. En primer lugar se aislaron, purificaron y caracterizaron las amonabactinas Amo P 693 y Amo P 750. Posteriormente, mediante espectrometría de masas, se identificaron los complejos de Fe(III) y Ga(III) de las amonabactinas Amo T 732, Amo T 789, Amo P 693 y Amo P 750. Por otra parte, se realizó el clonaje, la expresión y purificación de rFstA, proteína receptora de sideróforos de esta bacteria.

[Abstract] The summary of each chapter of this doctoral thesis is presented below. Chapter I: This section contains a description of the importance of aquaculture in the world and the diseases caused by pathogenic bacteria which produce great economic losses to this industry. Similarly, it shows some ways to treat these diseases and the possibility of using the bacterial iron uptake systems to develop new vaccines and antimicrobials. Finally, some strategies for the heterologous expression of membrane proteins, their purification and their crystallization are presented. Chapter II: We made the cloning, expression and purification of rFrpA, a receptor protein of piscibactin, which is a siderophore from Photobacterium damselae subsp. piscicida. The obtained protein was used in vaccination trials, achieving protection in treated fish. Furthermore, using X-ray crystallography we proposed a tridimensional structure for rFrpA. On the other hand, we prepared advanced synthetic intermediates which allowed us to make progress in the total synthesis of piscibactin. Chapter III: We studied the siderophores produced by Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. Firstly, we isolated, purified, and characterized the amonabactins Amo P 693 and Amo P 750. Secondly, we identified the Fe(III) and Ga(III) complexes of amonabactins Amo T 732, Amo T 789, Amo P 693, and Amo P750, using mass spectrometry. Moreover, we made the cloning, expression and purification of rFstA, receptor protein of siderophores of this bacterium.