Estudio de los sideróforos y de las proteinas receptoras producidas por las bacterias patógenas de peces: "Photobacterium damselae subsp.psicicida y Aeromonas salmonicida subsp.salmonicida"
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http://hdl.handle.net/2183/17579Coleccións
- Teses de doutoramento [2150]
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Estudio de los sideróforos y de las proteinas receptoras producidas por las bacterias patógenas de peces: "Photobacterium damselae subsp.psicicida y Aeromonas salmonicida subsp.salmonicida"Autor(es)
Director(es)
Vila-Sanjurjo, AntónJiménez, Carlos
Rodríguez González, Jaime
Data
2016Centro/Dpto/Entidade
Universidade da Coruña. Departamento de Química Fundamental, Area de Química OrgánicaResumo
[Resumo]
A continuación preséntase o resumo de cada un dos capítulos que fan
parte desta tese doutoral.
Capítulo I: Nesta sección descríbese a importancia da acuicultura a
nivel mundial e as enfermidades causadas polas bacterias patóxenas que
producen grandes perdas económicas a esta industria. Do mesmo modo,
abórdase o tratamento destas enfermidades e a posibilidade de usar os
mecanismos de captación de ferro para desenvolver novas vacinas e
antimicrobiáns. Por último, preséntanse as estratexias para a expresión
heteróloga de proteínas de membrana, a súa purificación e cristalización.
Capítulo II: Realizouse a clonaxe, a expresión e purificación de FrpA,
proteína receptora da piscibactina, sideróforo de Photobacterium damselae
subsp. piscicida. A proteína obtida utilizouse en ensaios de vacinación
lográndose protección nos peixes tratados. Ademáis, mediante cristalografía de
Raios X realizouse unha aproximación á estrutura tridimensional de FrpA. Por
outra parte, preparáronse intermedios avanzados que permitiron progresar na
síntese total da piscibactina.
Capítulo III: Estudáronse os sideróforos producidos por Aeromonas
salmonicida subsp. salmonicida. En primeiro lugar illáronse, purificáronse e
caracterizáronse as amonabactinas Amo P 693 e Amo P 750. Posteriormente,
mediante espectrometría de masas, identificáronse os complexos de Fe(III) e
Ga(III) das amonabactinas Amo T 732, Amo T 789, Amo P 693 e Amo P 750.
Por outra parte, realizouse a clonaxe, a expresión e purificación de FstA,
proteína receptora de sideróforos desta bacteria. [Resumen] A continuación se presenta el resumen de cada uno de los capítulos que
hacen parte de esta tesis doctoral.
Capítulo I: En esta sección se describe la importancia de la acuicultura
a nivel mundial y las enfermedades causadas por bacterias patógenas que
producen grandes pérdidas económicas a esta industria. Del mismo modo, se
aborda el tratamiento de estas enfermedades y la posibilidad de usar los
mecanismos de captación de hierro para desarrollar nuevas vacunas y
antimicrobianos. Por último se presentan las estrategias para la expresión
heteróloga de proteínas de membrana, su purificación y cristalización.
Capítulo II: Se realizó el clonaje, la expresión y purificación de rFrpA,
proteína receptora de la piscibactina, sideróforo de Photobacterium damselae
subsp. piscicida. La proteína obtenida se utilizó en ensayos de vacunación
lográndose protección en los peces tratados. Además, mediante cristalografía
de rayos X se realizó una aproximación a la estructura tridimensional de rFrpA.
Por otra parte, se prepararon intermedios avanzados que permitieron progresar
en la síntesis total de la piscibactina.
Capítulo III: Se estudiaron los sideróforos producidos por Aeromonas
salmonicida subsp. salmonicida. En primer lugar se aislaron, purificaron y
caracterizaron las amonabactinas Amo P 693 y Amo P 750. Posteriormente,
mediante espectrometría de masas, se identificaron los complejos de Fe(III) y
Ga(III) de las amonabactinas Amo T 732, Amo T 789, Amo P 693 y Amo P 750.
Por otra parte, se realizó el clonaje, la expresión y purificación de rFstA,
proteína receptora de sideróforos de esta bacteria. [Abstract]
The summary of each chapter of this doctoral thesis is presented below.
Chapter I: This section contains a description of the importance of
aquaculture in the world and the diseases caused by pathogenic bacteria which
produce great economic losses to this industry. Similarly, it shows some ways
to treat these diseases and the possibility of using the bacterial iron uptake
systems to develop new vaccines and antimicrobials. Finally, some strategies
for the heterologous expression of membrane proteins, their purification and
their crystallization are presented.
Chapter II: We made the cloning, expression and purification of rFrpA, a
receptor protein of piscibactin, which is a siderophore from Photobacterium
damselae subsp. piscicida. The obtained protein was used in vaccination trials,
achieving protection in treated fish. Furthermore, using X-ray crystallography we
proposed a tridimensional structure for rFrpA. On the other hand, we prepared
advanced synthetic intermediates which allowed us to make progress in the
total synthesis of piscibactin.
Chapter III: We studied the siderophores produced by Aeromonas
salmonicida subsp. salmonicida. Firstly, we isolated, purified, and characterized
the amonabactins Amo P 693 and Amo P 750. Secondly, we identified the
Fe(III) and Ga(III) complexes of amonabactins Amo T 732, Amo T 789, Amo P
693, and Amo P750, using mass spectrometry. Moreover, we made the cloning,
expression and purification of rFstA, receptor protein of siderophores of this
bacterium.
Palabras chave
Sideróforos-Síntesis
Peces-Enfermedades
Bacterias patógenas
Photobacterium-Lucha contra la
Peces-Enfermedades
Bacterias patógenas
Photobacterium-Lucha contra la
Descrición
Programa Oficial de Doutoramento en Química Ambiental e Fundamental. 5031V01
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