Estudio "in vitro" de la respuesta inflamatoria inducida por lipopolisacárido bacteriano en células mononucleares en la artritis reumatoide

Abstract

[Resumen]: La artritis reumatoide (AR) es uno de los trastornos autoinmunes más comunes. Se muestra como una enfermedad crónica, caracterizada por la inflamación del tejido sinovial de las articulaciones, siendo capaz de provocar daños articulares a largo plazo acompañados de dolor. Se puede desencadenar por factores genéticos, epigenéticos o ambientales, teniendo gran influencia el incremento de estrés oxidativo y el propio envejecimiento. Con este trabajo se busca profundizar en el desarrollo de la respuesta inmune que caracteriza la artritis reumatoide, por lo que se empleó la línea celular THP-1 monocítica. Esta es una línea de monocitos de leucemia humana con la que se pueden observar las funciones de los monocitos/macrófagos in vitro. Con este fin, se diferenciaron las células THP-1 a macrófagos a través del inductor forbol-12- miristato-13-acetato (PMA). Posteriormente, se comprobó la eficacia del lipopolisacárido bacteriano (LPS) sobre la inducción de la respuesta inflamatoria, utilizándolo como control positivo del estudio piloto. Para ello, se cuantificaron mediante expresión génica los mediadores inflamatorios que forman parte del inflamasoma (NLRP3, Caspasa-1 e IL-1β) así como la citoquina IL-8, a través de la PCR a tiempo real. También se determinó la posible capacidad de regulación de la respuesta inflamatoria que tiene el resveratrol, un compuesto antiinflamatorio natural.[Resumo]: A artrite reumatoide (AR) é un dos trastornos autoinmunes máis comúns. Móstrase como unha enfermidade crónica, caracterizada pola inflamación do tecido sinovial das articulacións, sendo capaz de provocar danos articulares a longo prazo acompañados de dor. Pódese desencadear por factores xenéticos, epixenéticos ou ambientais, tendo gran influencia o incremento do estrés oxidativo e o propio envellecemento. Con este traballo búscase profundar no desenvolvemento da resposta inmune que caracteriza a artrite reumatoide, polo que se empregou a liña celular THP-1 monocítica. Esta é unha liña de monocitos de leucemia humana coa que se poden observar as funcións dos monocitos/ macrófagos in vitro. Con esta finalidade, diferenciáronse as células THP-1 a macrófagos a través do indutor forbol-12- miristato-13- acetato (PMA). Posteriormente, comprobouse a eficacia do lipopolisacárido bacteriano (LPS) sobre a indución da resposta inflamatoria, utilizándoo como control positivo do estudo piloto. Para iso, cuantificáronse mediante expresión xénica os mediadores inflamatorios que forman parte do inflamasoma (NLRP3, Caspasa-1 e IL-1β) así como a citoquina IL-8, a través da PCR a tempo real. Tamén se determinou a posible capacidade de regulación da resposta inflamatoria que ten o resveratrol, un composto antiinflamatorio natural.[Abstract]: Rheumatoid arthritis (RA) is one of the most common autoimmune disorders. It is a chronic disease characterized by inflammation of the synovial tissue of the joints, capable of causing long-term joint damage accompanied by pain. It can be triggered by genetic, epigenetic or environmental factors, being the increase of oxidative stress and ageing itself a great influence. In this work, we seek to deepen in the development of the immune response that characterizes rheumatoid arthritis, so the monocytic THP-1 cell line was used. This is a human leukemia monocyte line with which the functions of monocytes/macrophages can be observed in vitro. To this end, THP-1 cells were differentiated to macrophages via the inducer phorbol-12- myristate-13-acetate (PMA). Subsequently, the efficacy of bacterial lipopolysaccharide (LPS) on the induction of the inflammatory response was tested by using it as a positive control in the pilot study. For this purpose, the inflammatory mediators that are part of the inflammasome (NLRP3, Caspase-1 and IL-1β) as well as the cytokine IL-8 were quantified by gene expression through real-time PCR. The possible capacity of resveratrol, a natural anti-inflammatory compound, to regulate the inflammatory response was also determined.