Estudios de la forunculosis en pez cebra mediante Aeromonas salmonicida subps. salmonicida marcada con la proteína verde fluorescente (GFP) y con una sonda fluorescente del sideróforo amonabactina

Abstract

[Resumen] El pez cebra (Danio rerio) es un potencial organismo modelo en el estudio de las enfermedades que afectan a los peces en la acuicultura, así como en su tratamiento posterior. Este trabajo se centra en el estudio de la forunculosis en el pez cebra, patología provocada por Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida, que genera grandes pérdidas económicas en la industria acuícola. Se evaluó la mortalidad y las propiedades fluorescentes de A. salmonicida marcada con dos sondas fluorescentes en larvas de pez cebra. Las sondas empleadas son la proteína verde fluorescente (GFP) y un conjugado sideróforo amonabactina - sulforodamina B (AMB-SRB), cuyas propiedades se analizaron mediante microscopia de fluorescencia convencional y de barrido láser confocal. Se obtuvieron imágenes de la distribución de ambas sondas en las larvas de pez cebra y, en consecuencia, de A. salmonicida. Se demostró que la bacteria provoca un efecto nocivo sobre el pez cebra, llegando a provocar la muerte al exponerse a la mayor concentración ensayada. En cuanto a la fluorescencia de las sondas, la señal de ambas se observa en el tracto digestivo, mostrándose mayor intensidad con la bacteria marcada con GFP. Estos resultados son útiles para profundizar en el estudio de la forunculosis en peces de acuicultura.[Resumo] O peixe cebra (Danio rerio) é un potencial organismo modelo no estudio das enfermidades que afectan aos peixes na acuicultura, así como no seu tratamento posterior. Este traballo céntrase no estudo da furunculose no peixe cebra, patoloxía provocada por Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida, que xera grandes pérdidas económicas na industria acuícola. Avaliouse a mortalidade e as propiedades fluorescentes de A. salmonicida marcada con dúas sondas fluorescentes en larvas de peixe cebra. As sondas empregadas son a proteína verde fluorescente (GFP) e un conxugado sideróforo amonabactina - sulforodamina B (AMB-SRB), cuxas propiedades foron analizadas mediante microscopia de fluorescencia convencional e de varrido láser confocal. Obtivéronse imaxes da distribución de ambas sondas nas larvas de peixe cebra e, en consecuencia, de A. salmonicida. Demostrouse que a bacteria provoca un efecto nocivo sobre o peixe cebra, chegando a provocar a morte ao exponerse á maior concentración probada. En canto á fluorescencia das sondas, o sinal de ambas obsérvase no tracto dixestivo, mostrándose maior intensidade coa bacteria marcada con GFP. Estes resultados son útiles para profundizar no estudo da furunculose en peixes de acuicultura.[Abstract] The zebrafish (Danio rerio) is a potential model organism in the study of diseases that affect fish in aquaculture, as well as in their subsequent treatment. This work focuses on the study of furunculosis in zebrafish, a pathology caused by Aeromonas salmonicida subps. salmonicida, which generates large economic losses in the aquaculture industry. Mortality and fluorescent properties of A. salmonicida labeled with two fluorescent probes were evaluated in zebrafish larvae. The probes used are the green fluorescent protein (GFP) and the siderophore amonabactin - sulforhodamine B conjugate (AMBSRB), whose properties were analyzed by convencional and confocal laser scanning fluorescence microscopy. Images of the distribution of both probes in zebrafish larvae and, consequently, of A. salmonicida was obtained. The bacteria was shown to cause a harmful effect on zebrafish, leading to death upon exposure to the highest concentration tested. As for the fluorescence of the probes, the signal of both is observed in the digestive tract, showing great intensity with the bacteria labeled with GFP. These results are useful to deepen the study of furunculosis in aquaculture fish.