Estudo do papel de mTOR no proceso inflamatorio dos sinoviocitos

Abstract

[Resumen] La AR es una enfermedad inflamatoria autoinmune crónica multifactorial que se caracteriza por la proliferación de las células sinoviales residentes y el acúmulo de leucocitos en la membrana sinovial y líquido sinovial, que recubre las articulaciones. Este exceso de celularidad promueve la inflamación y destrucción articular. El factor proteico mTOR juega un papel clave en el desarrollo de esta afección, ya que, es el encargado de regular la homeostasis y el crecimiento celular. El objetivo de este trabajo consiste en evaluar el papel funcional de la vía mTOR en sinoviocitos. Para ello, se estudió la fosforilación de la proteína ribosomal S6, marcador de la actividad mTOR, a través de técnicas de Western blot y citometría de flujo. Para ello, se realizaron cultivos de sinoviocitos humanos y de rata, expuestos a un estímulo proinflamatorio (TNF-α), que simula las condiciones de la AR, y a un inhibidor específico de mTOR (rapamicina). En los cultivos humanos, la exposición fue de 24 h, mientras que en los cultivos de rata se evaluaron dos tiempos de exposición: 1 h y 7 días. Los resultados mostraron que la vía mTOR se activa en respuesta a TNF-α y que su actividad es inhibida en presencia de rapamicina, aunque este efecto se observó únicamente en exposiciones de corta duración.[Resumo] A AR é una enfermidade inflamatoria autoinmune crónica multifactorial caracterizada pola proliferación das células sinoviais residentes y acúmulo de leucocitos na membrana sinovial e líquido sinovial, que recubre as articulacións. Este exceso na celularidade promove a inflamación e a destrucción articular. O factor proteico mTOR xoga un papel clave no desenvolvemento desta afección, xa que, é o engardado de regular a homostase e o crecemento celular. O obxetivo de este traballo consiste en avaliar o papel funcional da vía de mTOR en sinoviocitos. Para iso, estudouse a fosforilación da proteína ribosomal S6, marcador da activade mTOR, a través da técnica de Western blot e citometría de fluxo. Para iso, realizáronse cultivos de sinoviocitos humanos e de rata, expostos a un estímulo proinflamatorio (TNF-α), que simula as condicións da AR, e a un inhibidor específico de mTOR (rapamicina). Nos cultivos humanos, a exposición foi de 24 h, mentres que nos cultivos de rata avaliaronse dous tempos de exposición: 1 h e 7 días. Os resultados amosaron que a vía mTOR activouse en resposta a TNF-α e a súa actividade é inhibida en presencia de rapamicina, aínda que este efecto observouse únicamente na exposición de corta duración.[Abstract] The RA is a chronic, multifactorial autoimmune inflammatory disease characterised by the proliferation of resident synovial cells and the accumulation of leukocytes in the synovial membrane and synovial fluid, which line the joints. This excess cellularity promotes inflammation and joint destruction. The mTOR protein factor plays a key role in the development of this condition, as it is responsible for regulating cellular homeostasis and growth. The aim of this study is to evaluate the functional role of the mTOR pathway in synoviocytes. To this end, the phosphorylation of the ribosomal protein S6, a marker of mTOR activity, was analysed using Western blotting and flow cytometry techniques. Human and rat synoviocyte cultures were exposed to a proinflammatory stimulus (TNF-α), which mimics the conditions of RA, and to a specific mTOR inhibitor (rapamycin). Inhuman cultures, the exposure lasted 24 h, whereas in rat cultures, two exposure times were assessed: 1 h and 7 days. The results showed that the mTOR pathway is activated in response to TNF-α and that its activity is inhibited in the presence of rapamycin, although this effect was only observed after short-term exposure.