Implicación de la familia de miARNs miR-200 en la adipogénesis

Abstract

[Resumen] Los microARNs (miARNs) son pequeños ARNs endógenos de 18-24 nucleótidos, no codificantes y que tienen la capacidad de silenciar el ARNm regulando transcripcionalmente la expresión génica. Durante las últimas décadas, las tasas de obesidad se han incrementado en todo el mundo, no siendo España una excepción. En la obesidad, el proceso de adipogénesis determina en gran medida el número de adipocitos en los depósitos de grasa corporal. En este trabajo se estudió la implicación de la familia miR- 200 en la adipogénesis y la ruta de la señalización de la insulina. Para ello, se usó la línea celular 3T3-L1 tratada previamente con factores lentivirales para sobreexpresar miR-141 y miR-200c e inhibir miR-200b. Posteriormente se indujo la adipogénesis y se observó su diferenciación durante siete días. Se cuantificó la cantidad de triglicéridos gracias a una tinción de Oil Red-O y se analizó la expresión proteica de proteínas clave de la ruta de señalización de la insulina y de la lipogénesis de novo. Los resultados muestran que altos niveles de miR-141 y miR-200c disminuyen el número de adipocitos maduros y la cantidad de triglicéridos, mientras que la inhibición de miR-200b provoca el efecto contrario. La sobreexpresión de miR-141 y miR-200c provoca que no se produzcan aumentos estadísticamente significativos en pAKT tras el tratamiento con insulina, efecto contrario al producido al inhibir miR-200b. En base a estos datos se puede concluir que la sobreexpresión de miR-141 y miR-200c produce una inhibición de la adipogénesis y un empeoramiento en la ruta de señalización de la insulina y, por el contrario, la inhibición de miR-200b provoca una estimulación de la adipogénesis y un aumento de la sensibilidad a la insulina, sugiriendo una implicación de la familia miR-200 en ambas rutas.

[Resumo] Os microARNs (miARNs) son pequenos ARNs endóxenos de 18-24 nucleótidos, non codificantes e que teñen a capacidade de silenciar o ARNm regulando transcripcionalmente a expresión xénica. Durante as últimas décadas, as taxas de obesidade incrementáronse en todo o mundo, non sendo España unha excepción. Na obesidade, o proceso de adipoxénese determina en gran medida o número de adipocitos nos depósitos de graxa corporal. Neste traballo estudouse a implicación da familia miR-200 na adipoxénese e a ruta de sinalización da insulina. Para elo, usouse a liña celular 3T3-L1 tratada previamente con factores lentivirais para sobreexpresar miR-141 e miR-200c e inhibir miR-200b. Posteriormente induciuse a adipoxénese e observouse a súa diferenciación durante sete días. Cuantificouse a cantidade de triglicéridos grazas a unha tinguidura de Oil Red-O e analizouse a expresión proteica de proteínas clave da ruta de sinalización da insulina e da lipoxénese de novo. Os resultados mostran que altos niveis de miR-141 e miR-200c diminúen o número de adipocitos maduros e a cantidade de triglicéridos, mentres que a inhibición de miR-200b provoca o efecto contrario. A sobreexpresión de miR-141 e miR-200c provoca que non se produzan aumentos estatisticamente significativos en pAKT tralo tratamento con insulina, efecto contrario ao producido ao inhibir miR-200b. En base a estes datos pódese concluír que a sobreexpresión de miR-141 e miR-200c produce unha inhibición da adipoxénese e un empeoramento na ruta de sinalización da insulina e, polo contrario, a inhibición de miR- 200b provoca unha estimulación da adipoxénese e un aumento da sensibilidade á insulina, suxerindo unha implicación da familia miR-200 en ambas rutas.

[Abstract] MicroARNs (miARNs) are endogeneous small noncoding RNAs of 18-24 nucleotides, that have the capability to silence ARNm by genic expression transcriptionally regulation. During last decades, obesity rates have growth worldwide, not being Spain an exception. In obesity, adipogenesis process determines largely the adipocytes number in body fat depots. In this work the implication of miR-200 family in adipogenesis and the insulin signalizing pathway were studied. For this, 3T3-L1 cell line previously treated with lentiviral factors to overexpress miR-141 and miR-200c and to inhibit miR- 200b was used. Afterwards adipogenesis was inducted and its differentiation was followed for seven days. The amount of triglycerides was quantified by Oil Red-O stain and the protein expression of key proteins in insulin signalizing pathway and lipogenesis de novo was analyzed. Results show that high levels of miR-141 and miR-200c decrease the number of mature adipocytes and triglycerides quantity, while the inhibition of miR- 200b causes the opposite effect. The overexpression of miR-141 y miR- 200c causes no statistically significant increases in pAKT to occur after treatment with insulin, the opposite effect to that produced by inhibiting miR- 200b. Based on these data it can be concluded that miR-141 and miR-200c overexpression produces an adipogenesis inhibition and a worsening of insulin signaling pathway and, on the contrary, miR-200b inhibition causes an adipogenesis stimulation and an insulin sensitivity increase, suggesting and implication of miR-200 family in both pathways.