Estudio sobre la regulación de la expresión de miR-34a por el lncRNA MALAT1 en cáncer de esófago

Abstract

[Resumen]: El cáncer de esófago (EC), es una enfermedad que causa una gran cantidad de muertes en todo el mundo. Se ha observado que, en múltiples cánceres, los RNA largos no codificantes (lncRNAs) y los microRNAs, juegan papeles críticos en la progresión de los tumores. No obstante, su actuación a nivel molecular no ha sido descubierta en su totalidad. Este estudio plantea una metodología para explorar la posible función y mecanismos asociados del lncRNA MALAT1 en el desarrollo del cáncer de esófago, centrándose en su interacción con el microRNA miR-34a. Como objetivos, se cuantificará en primer lugar por qPCR, la expresión de MALAT1 y miR-34a tanto en tejidos como en líneas celulares sanas y de EC. Una vez conocida la expresión, se estudiará el papel de MALAT1 en la progresión de EC, inhibiendo su expresión en la línea celular correspondiente y cuantificando tanto la expresión de MALAT1 como de miR-34a nuevamente por qPCR. Además, también se estudiará en la línea celular de EC mediante el ensayo de la luciferasa, el efecto de dicha inhibición sobre miR-34a y los oncogenes c- Myc y Met. Con el ensayo de la luciferasa, se estudiará también el efecto de miR-34a sobre c-Myc y Met, así como la especificidad de la unión de MALAT1 y miR-34a, estudio que también se reforzará con el ensayo biotin pull down. Por último, se llevará a cabo un ensayo de inmunoprecipitación para estudiar la presencia de MALAT1 y miR-34a en el mismo complejo RISC (Ago2).[Abstract]: Esophageal cancer (EC) is a malignancy that causes a lot of mortality worldwide. It is observed, that both microRNAs and long non-coding RNAs (lncRNAs) have critical roles in the progression of tumors. However, the underlying molecular mechanism has not been fully characterized. The present study aimed to explore the function and associated mechanisms of lncRNA metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript1 (MALAT1) in EC development by focusing on its interaction with miR-34a. The objectives will be, in the first place, the quantification of MALAT1 and miR-34a expression in tissues, healthy cell lines and EC. Once the expression is known, the role of MALAT1 in the progression of EC will be studied, inhibiting its expression in the corresponding cell line and quantifying the expression of MALAT1 and miR-34a again by qPCR. In addition, the effect of such inhibition on miR-34a, c-Myc and Met, will also be studied in the EC cell line through the luciferase assay. With the luciferase assay, the effect of miR-34a on c-Myc and Met, as well as the specifity of the MALAT1 and miR- 34a junction, will also be studied. This study, will also be reinforced with the biotin pull down experiment. Finally, an inmunoprecipitation test will be conducted to study the presence of MALAT1 and miR-34a in the same RISC complex (Ago2).[Resumo]: O cancro de esófago (EC) é unha enfermidade que causa un gran número de mortes en todo o mundo. En varios cancros, demostrouse que os lncRNAs e os microARN xogan un papel crítico na progresión do tumor. Non obstante, a súa acción a nivel molecular non se descubriu completamente. Este estudo propón unha metodoloxía para explorar o posible papel e os mecanismos asociados do lncRNA MALAT1 no desenvolvemento do cancro de esófago, centrándose na súa interacción co microRNA miR-34a. Como obxectivos, a expresión de MALAT1 e miR-34a cuantificarase primeiro por qPCR tanto nos tecidos como nas liñas celulares saudables e EC. Unha vez coñecida a expresión, estudarase o papel de MALAT1 na progresión do EC, inhibindo a súa expresión na liña celular correspondente e cuantificando tanto a expresión de MALAT1 como a miR-34a de novo por qPCR. Ademais, o efecto da devandita inhibición sobre miR.34a e os oncoxenes c-Myc e Met tamén se estudará na liña celular EC mediante o ensaio da luciferase. Co ensaio da luciferase, tamén se estudará o efecto do miR-34a sobre c-Myc e Met, así como a especificidade da unión de MALAT1 e miR-34a, un estudo que tamén se reforzará co ensaio de biotin pull down. Finalmente, levarase a cabo un ensaio de inmunoprecipitación para estudar a presenza de MALAT1 e miR-34a no mesmo complexo RISC (Ago2).