Modelo de inflamación para la enfermedad periodontal

Abstract

[Resumen] Introducción: La enfermedad periodontal es una patología inflamatoria producida por el desarrollo de una biopelícula inflamatoria en el surco gingival. Cuando se cronifica afecta al ligamento periodontal, siendo una de las principales causas de pérdida de los elementos de inserción de los dientes. Objetivo: Puesta a punto de un modelo de inflamación para la enfermedad periodontal en una línea celular de fibroblastos humanos inmortalizados (Immortalized human gingival fibroblas with Human Telomerase reverse transcriptase, IHGF-hTERT). Metodología: Se estudió como afecta el cambio de medio de cultivo y de concentración de suero bovino fetal (SBF) (al 10% y al 0,5%). Se realizaron estudios de expresión génica de la línea IHGF-hTERT tras 24 horas de cultivo con concentraciones crecientes [0; 0,1; 0,5; 1; 1,5; 2 μg/ml] de lipopolisacáridos (LPS) de Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis). La cuantificación relativa de la expresión de interleucina 6 (IL-6), interleucina 8 (IL-8) y la ciclooxigenasa 2 (COX-2) se realizó mediante la técnica reacción en cadena de la polimerasa a tiempo real (q-PCR). La viabilidad de la línea celular IHGF-hTERT frente LPS de P. gingivalis se estudió mediante un ensayo colorimétrico. Resultados: El ensayo de los medios de cultivo no mostró diferencias ni en la morfología ni la confluencia celular, entre los diferentes medios a una concentración de SBF del 10%. Sin embargo, sí se observaron diferencias en la confluencia celular en los medios al 0,5% SBF. Cuando la línea IHGF-hTERT fue sometida a concentraciones crecientes de LPS se observó un aumento de la producción de IL-6 y IL-8, y una reducción en la producción de COX-2. Las muestras sometidas a 1 μg/ml de LPS de P. gingivalis fueron las que más modificaron la expresión génica de los mediadores de la inflamación estudiados. La viabilidad celular no se ve afectada a dicha concentración. Conclusiones: En la línea celular IHGF-hTERT las bajas concentraciones de SBF limitan el crecimiento celular. Los LPS de P. gingivalis inducen la modificación de la producción de mediadores de la inflamación, sin afectar a la viabilidad del cultivo celular.

[Abstract] Introduction: Periodontal disease is an inflammatory pathology. which is produced by the development of an inflammatory biofilm in the gingival sulcus. In a chronic stage, it affects the periodontal ligament. It is one of the main causes of loss of the insertion elements of the teeth. Objective: Development of a model of inflammation for periodontal disease in a line of immortalized human fibroblasts (IHGF-hTERT). Methodology: We studied the optimal culture medium for the development of the inflammation model using different concentrations of fetal bovine serum (FBS) (10% and 0.5%). Gene expression studies of the IHGF-hTERT line were performed after 24 hours of culture with increasing concentrations [0; 0.1; 0.5; 1; 1.5; 2 μg/ml] of LPS (lipopolysaccharides) of P. gingivalis. The relative quantification of the expression of IL-6, IL-8 and COX-2 was performed by real-time PCR (q-PCR). The LPS cell viability of P. gingivalis was studied by of a colorimetric assay. Results: The culture media assay didn’t show differences in morphology or cell confluence between the different media at a FBS concentration of 10%. The samples with concentration 0.5% FBS, the assay showed differences in the cell confluence. When the cell line is stimulated with different concentrations LPS of P. gingivalis for 24 hours, the samples stimulated to 1 μg/ml of P. gingivalis LPS were the most altered gene expression of inflammatory mediators studied. Cell viability is not affected at said concentration.

[Resumo] Introdución: A enfermidade periodontal é unha patoloxía inflamatoria. É producida polo desenvolvemento dunha biopelícula inflamatoria no surco xenxival. Cando a enfermidade volvese crónica, afecta ao ligamento periodontal, por iso, é unha das principais causas de perda dos elementos de inserción dos dentes. Obxectivo: Desenvolvemento dun modelo de inflamación para enfermidade periodontal nunha liña de fibroblastos humanos inmortalizados (IHGF-hTERT). Metodoloxía: Na liña celular IHGF-hTERT estudouse si o cambio e na redución da concentración de SBF (do 10% ao 0,5%), afecta á morfoloxía e o crecemento celular. Os estudos de expresión xénica da liña IHGF-hTERT realizáronse tras 24 horas de cultivo con concentracións crecentes [0; 0,1; 0,5; 1; 1.5; 2 μg/ml] de LPS de P. gingivalis. A cuantificación relativa da expresión de IL-6, IL-8 e COX-2 realizouse mediante q-PCR. A viabilidade das células LPS de P. gingivalis foi estudada por medio dun ensaio colorimétrico. Resultados: O ensaio de medios de cultivo non mostrou diferenzas na morfoloxía nin na confluencia celular entre os diferentes medios cunha concentración de 10% de SBF. Sin embargo, observanse diferenzas na confluencia celular nos medios cunha concentración do 0,5% SBF. Os ensayos de expresión xénica mostraron aumento na produción de IL-6 e IL-8, e unha redución na produción de COX-2, cando a liña IHGF-hTERT foi sometida durante 24 horas a LPS de P. gingivalis. A concentración 1 μg / ml foi a que máis inflúe na produción. A viabilidade celular non foi afectada nesa concentración. Conclusións: Na liña celular IHGF-HTERT as baixas concentracions de SBF limitan o crecemento celular. LPS de P. gingivalis induce a modificación da produción de mediadores da inflamación, sen modificar a viabilidade da liña.