Análisis de la expresión del gen KlHIS4 mediante genes reporteros en condiciones de limitación de nitrógeno

Abstract

[Resumen] La regulación transcripcional de HIS4 en las levaduras Saccharomyces cerevisiae y Kluyveromyces lactis presenta importantes diferencias; entre ellas, la regulación en condiciones de limitación de nitrógeno, relacionada con el factor Nit2. En el promotor del gen de K. lactis, KlHIS4, se han identificado dos secuencias de unión para dicho factor; por lo que, en el presente trabajo se analiza si estas secuencias son responsables de la regulación del gen, en estas condiciones. Para ello, se realizó la transformación de la cepa MW190-9B de K. lactis con vectores con diferentes longitudes del promotor de KlHIS4, fusionados al gen reportero lacZ de E. coli. Se determinó la actividad específica de la β-galactosidasa y se analizó estadísticamente, si existían diferencias significativas según el medio de cultivo y según la longitud de los promotores del gen KlHIS4. Los resultados obtenidos mostraron, en condiciones de limitación de nitrógeno, un aumento de la actividad β-galactosidasa en la cepa C2 (que presenta un plásmido con un promotor de 447 pb, que incluye las dos secuencias cis para Nit2); comparándolo con la cepa C1 (que no posee la secuencia para Nit2 en posición -339). Por lo que la secuencia cis para Nit2 en posición -339 podría ser la responsable en la regulación de KlHIS4. Aunque, debido a los datos obtenidos, no se puede descartar la participación de otras secuencias.

[Abstract] The transcriptional regulation of HIS4 in the yeasts Saccharomyces cerevisiae and Kluyveromyces lactis has important differences; between them, the regulation in conditions of nitrogen limitation, related to the Nit2 factor. Two consensus sequences have been identified in the promoter of K. lactis gene, KIHIS4. So in this work, it is analyzed if these sequences are responsible of the gene regulation in these conditions. For this reason, the K. lactis strain MW190-9B was transformed with two vectors including different HIS4 promoter length of K. lactis, fused to the reporter gene lacZ of E. coli. The specific activity of the β-galactosidase was measured and analyzed statistically to determinate if significant differences exist according to the culture medium and/or the KlHIS4 promoters length. The results showed, in conditions of nitrogen limitation, an increment of the β-galactosidase activity in C2 strain (it has a plasmid with a 447 pb promoter; which includes both Nit2 cis sequences); comparing it with C1 strain (without the Nit2 sequence located in position -339). So the Nit2 cis sequence in position -339 could be the responsible for the regulation of KlHIS4. However, the participation of other sequences could not be refused.