Aislamiento de genes concretos de una genoteca

Abstract

[Resumen] Las librerías genómicas o genotecas contienen el genoma completo de un organismo determinado, digerido en fragmentos de distinta longitud e insertado en vectores de clonación, siendo un recurso continuo para el estudio de genes concretos. Existen distintas técnicas para aislar un gen específico a partir de una genoteca, en este trabajo se adaptó la estrategia del protocolo de mutagénesis dirigida con el objetivo de aislar un gen concreto, en este caso LAS2 de una genoteca doble híbrido de Saccharomyces cerevisiae. Para ello se obtuvo por PCR un fragmento de la región codificante del gen que fue empleado como megaprimer para aislar el clon que contiene LAS2 (SMP3). Se describen las sucesivas modificaciones para optimizar el protocolo hasta conseguir potenciales candidatos. El análisis por digestión enzimática indica que se obtuvieron al menos dos clones que contenían el gen deseado.

[Resumo] As librerías xenómicas ou xenotecas conteñen o xenoma completo dun determinado organismo, dixerido en fragmentos de distinta lonxitude e inserido en vectores de clonación, sendo un recurso continuo para o estudo de xenes concretos. Existen diferentes técnicas para illar un xene específico dunha xenoteca, neste traballo adaptouse a estratexia do protocolo de mutaxénese dirixida co obxectivo de illar un xene concreto, neste caso LAS2 (SMP3) dunha xenoteca dobre híbrido de Saccharomyces cerevisiae. Para iso conseguiuse mediante PCR un fragmento da rexión codificante do xene que empregouse como megaprimer para illar o clon que contén LAS2. Descríbense sucesivas modificacións para optimizar o protocolo ata obter posibles candidatos. A análise por dixestión enzimática indica que obtivéronse polo menos dous clons que contiñan o xene desexado.

[Abstract] Genomic libraries contain the complete genome of a particular organism, which has been digested into fragments of different lengths and inserted into cloning vectors, in order to be used as a continuous resource for the study of specific genes. There are different techniques to isolate an individual gene from a genomic library, in this work the strategy of the directed mutagenesis protocol has been adapted in order to isolate a specific gene, in this case LAS2 from two-hybrid Saccharomyces cerevisiae genomic library. With a view to achieving thus, a fragment of the coding region of the gene was obtained by PCR, which had been used as a megaprimer to isolate the clone containing LAS2 (SMP3). Successive modifications are described to optimize the protocol until potential candidates are obtained. Analysis by enzymatic digestion indicates that at least two clones containing the desired gene have been obtained.