Caracterización de cíbridos trasmitocondriales

Abstract

Introducción: Los cíbridos se obtuvieron a partir de líneas celulares inmortales desprovistas de ADN mitocondrial (ADNmt) (línea celular Rho-0) con plaquetas que portan el ADNmt. Con estas construcciones se puede estudiar el papel de los polimorfismos de una única base (SNPs) presentes en el ADNmt al tener el mismo fondo nuclear de ADN. Para confirmar la patogénesis y los tratamientos eficaces para enfermedades asociadas al ADNmt, estos modelos celulares son de gran utilidad. Algunos estudios indican que las mitocondrias están implicadas en la OA y que los haplogrupos de ADNmt contribuyen en la prevalencia y gravedad de la OA, así, las personas con el haplogrupo J presentan un riesgo menor de desarrollar OA, y los que llevan este haplogrupo en OA desarrollan una progresión menos severa de la enfermedad. Hay una posible explicación para este efecto protector. Algunas mutaciones que caracterizan al haplogrupo J pueden reducir la eficiencia del acoplamiento de la fosforilación oxidativa y la reducción de la producción de ATP y especies reactivas de oxígeno (ROS). Objetivos: Los objetivos principales de este trabajo consistieron en analizar los niveles de ROS, así como la expresión génica de dos enzimas detoxificadoras catalasa (CAT) y superóxido dismutasa 2 (SOD) y de tres genes mitocondriales NAD deshidrogenasa subunidad 1 (ND-1), citocromo B (Cyt-b) y citocromo c oxidasa subunidad 1 (COX-1) en cíbridos portadores del haplogrupo H y del J obtenidos tanto de pacientes sanos como artrósicos. Métodos: Los cíbridos se generaron fusionando células 143B.TK- Rho-0 con plaquetas de pacientes sanos y artrósicos, con haplogrupos de ADNmt H y J siguiendo la metodología propuesta por Chomyn en 1996. La producción de ROS fue medida por citometría de flujo. La expresión de genes mitocondriales y genes implicados en la detoxificación fueron evaluados mediante RT-PCR en un Light Cycler 480-II. Resultados y Discusión: El análisis de los niveles de ROS puso de manifiesto que los cíbridos H mostraban unos niveles más elevados que los J, dato que concuerda con los estudios previos donde se describe un papel protector del haplogrupo J en la patología artrósica, mediado entre otros factores, por una menor producción de ROS. Los niveles de expresión de las encimas detoxificadoras analizadas (CAT y SOD) en los cíbridos concuerdan con los niveles de dichas encimas detectados en suero de pacientes OA. Todos los datos obtenidos en el desarrollo del presente trabajo, apoyan los resultados previos y ayudan a confirmar el papel de la mitocondria en el proceso artrósico.